EAE 模型誘導(dǎo)手冊

EAE 模型誘導(dǎo)手冊：

EAE模型是一種以特異性致敏的CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)為主的，以中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)小血管周圍出現(xiàn)單個(gè)核細(xì)胞浸潤及髓鞘脫失為特征的自身免疫性疾病，是人類多發(fā)性硬化（MS）的理想動(dòng)物模型，在臨床神經(jīng)免疫學(xué)的研究中具有重要意義。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：成年雌鼠C57/BL6小鼠 8周  15只

試劑準(zhǔn)備

器材準(zhǔn)備

 試劑配制：

1：髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白MOG (35-55)配制： 將AnaSpec公司的MOG (35-55)多肽蛋白溶于PBS中，濃度為2mg/ml

2: 準(zhǔn)備*弗氏佐劑（CFA）：將BD公司的結(jié)核菌素H37Ra粉末溶于MPBIO公司的弗氏不*佐劑而成（終濃度為4MG/ML）

 稱取80mg結(jié)核菌素H37Ra粉末與不*佐劑混合，注意每次加入一點(diǎn)點(diǎn)不*佐劑，在研缽中充分研磨保證結(jié)核菌素*懸浮。

3:將配好的MOG (35-55)溶液和*弗氏佐劑1：1混合（MOG終濃度為1MG/ML),保存于4度冰箱，并于24小時(shí)內(nèi)使用

5：百日咳毒素（PTX）配制： 取一只listlabs公司的百日咳毒素粉末，在管子中加入500ulPBS溶液，濃度為100ug/ml,保存于4度冰箱,使用前再用PBS稀釋100倍

實(shí)驗(yàn)步驟：

1：*天：小鼠胸腹部皮下注射接種MOG和Mtb/CFA混合液 ，復(fù)測2-4個(gè)點(diǎn)，共150ul/只。再腹腔注射稀釋后的百日咳毒素溶液（濃度為1ug/ml）200ul/只

2：第三天：再加強(qiáng)注射百日咳毒素溶液（濃度為1ug/ml）200ul/只