凝集素選購指南

凝集素（Lectin）是指一種從各種植物，無脊椎動物和高等動物中提純的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白，因其能凝集紅血球（含血型物質(zhì)），故名凝集素。其常見種類見表6-1。常用的為植物凝集素（Phytoagglutin, PNA），通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A（Conconvalina,ConA）、麥胚素（Wheat germ agglutinin, WGA）、花生凝集素（Peanut agglutinin, PNA）和大豆凝集素（Soybean agglutinin, SBA）等，凝集素是它們的總稱。凝集素不是來源或參與免疫反應的產(chǎn)物，它們之所以被收入本書，是由于凝集素具有的某些“親合”特性，能被免疫細胞化學技術方法所應用。因此，Ponder（1983）提出應稱“凝集素組織化學”而不能稱為“凝集素免疫組織化學”。

中文名

凝集素

外文名

Lectin

常用的

植物凝集素、花生凝集素等

提取物

糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白

主要形式存在

以糖蛋白和糖脂的形式存在

特    征

多價結(jié)合能力等

分類

凝集素可按糖的特異性、分子結(jié)構、結(jié)合位點和其功能進行分類。動物凝集素按分子結(jié)構分為C-型凝集素、S-型凝集素、P-型凝集素、I-型凝集素和正五聚蛋白（Pentraxins）。C-型凝集素是Ca2+依賴的凝集素；S-型凝集素是特異性識別β-半乳糖苷鍵的凝集素；P-型凝集素是特異性識別6磷酸甘露糖的凝集素；I-型凝集素是類似免疫球蛋白的凝集素；正五聚蛋白（Pentraxins）是有五個亞基的凝集素。

糖—凝集素—糖法：

本法是利用過量的凝集素與組織切片中特定的糖基相結(jié)合。經(jīng)沖洗后，凝集素上還存在未被占用的結(jié)合部位，將這些部位與有過氧化物酶標記的特異性糖基相結(jié)合，形成一個三明治樣的糖—凝集素—糖的結(jié)合物。

（1）脫蠟至水。

（2）用含3%的H2O2的甲醇阻斷內(nèi)源性過氧化物酶10min。

（3）用100μg/ml的凝集素孵育30min。

（4）TBS洗3次，每次3min。

（5）用100μg/mlHRP標記的糖液孵育30min。

（6）TBS洗3次，每次3min。

（7）DAB呈色、脫水、透明、封固。

本法特異性強，靈敏度高，因為這不象生物素—抗生物素法那樣要改變凝集素，又不需要像抗體那樣要制備抗體。HRP本身含有甘露糖，能與刀豆凝集素A、扁豆凝集素和豌豆凝集素結(jié)合。但對其它的凝集素，本法目前普及還有一定困難，因為要將過氧化物酶結(jié)合到其它凝集素上，就需要將一個適當?shù)奶妓衔锘鶊F嵌入過氧化物酶，稱為糖基化（glycosylation），方法雖不復雜（Lee 等1976），但需一定的試劑和設備。商品化能提供的糖基化過氧化物酶品種尚有限。

凝集素結(jié)合特異性指南

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