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Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號轉(zhuǎn)導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒，以研究生物化學和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，我們還在產(chǎn)品線中為微管，微管蛋白，運動蛋白，小G蛋白效應物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務。
(Cat. # PHDG1-A) 300 Slides
產(chǎn)品用途包括
· 固定組織切片和組織培養(yǎng)細胞制劑中肌動蛋白絲的熒光染色。 注意：與許多肌動蛋白抗體不同，Acti-stain™488鬼筆環(huán)肽僅與F-肌動蛋白結合，導致低背景熒光。此外，通過Acti染色結合F-肌動蛋白在物種之間沒有明顯差異。
· 體外穩(wěn)定熒光肌動蛋白絲的制備。
肌動蛋白染色在確定活細胞和固定細胞中細胞骨架的結構和功能方面非常有用。肌動蛋白細胞骨架在活細胞中是非常動態(tài)和不穩(wěn)定的結構，但是在探測或染色肌動蛋白結構之前可以用多聚甲醛固定。
材料
鬼筆環(huán)肽是來自蘑菇傘形毒蕈的七氨基酸肽毒素，其特異性地并且以高親和力（Kd 20nM）結合至肌動蛋白的聚合形式（F-肌動蛋白）。鬼筆環(huán)肽將肌動蛋白聚合的臨界濃度降低至小于1μg/ ml，從而充當聚合增強劑。鬼筆環(huán)肽已經(jīng)用專有的綠色熒光染料標記，使其可用于染色組織培養(yǎng)細胞和組織切片中的肌動蛋白絲（1，參見圖1）和無細胞制劑。Acti-stain™488鬼筆環(huán)肽標記的肌動蛋白絲保留了未標記肌動蛋白的許多功能特征，包括它們與肌球蛋白相互作用的能力。Actin-stain TM 488鬼筆環(huán)肽以橙色固體形式提供。
注意：鬼筆環(huán)肽是有毒的，必須小心處理（LD50人= 2mg / Kg）。
示例結果和規(guī)格
| 圖1.在瑞士3T3細胞中用Acti-stain TM 488染色的肌動蛋白應力纖維。 |
| 圖2. Acti-stain™鬼筆環(huán)肽的發(fā)射和激發(fā)掃描 |
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| 用抗 - 紐蛋白（紅色），Dapi（藍色細胞核）和F-肌動蛋白染色的Swiss 3T3細胞用Acti-stain TM 488（綠色F-肌動蛋白，Cat。＃PHDG1）染色。 |
| Acti-stain TM 488的吸光度和熒光掃描。將標記的鬼筆環(huán)肽稀釋到甲醇中，并分別在350-750和500-750nm之間掃描其吸光度和激發(fā)光譜。吸光度峰值在500nm處，熒光在550nm處。 |
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Acti-stain鬼筆環(huán)肽是可用的明顯的鬼筆環(huán)肽。表1描述了它們對F-肌動蛋白的亮度，光穩(wěn)定性，背景和親和力常數(shù)。將這些性能特征與其他熒光鬼筆環(huán)肽進行比較，您將看到使用Acti-stain™來滿足肌動蛋白染色要求的優(yōu)勢。
表1.熒光鬼筆環(huán)肽的生物化學特征
共軛 | 貨號 | 波長（Ex / Em） | 亮度（AFU *） | 光漂白的穩(wěn)定性（以秒為單位的半衰期**） | 背景 （總AFU在100nM時的百分比**） | 親和力（Kd，納摩爾） |
熒光毒傘素 | na | 485/535 FITC濾波器組 | 432 | 6 | 22 | 72 +/- 12 |
Acti-stain™488 | PHDG1 | 485/535 FITC濾波器組 | 832 | 57 | 五 | 55 +/- 8 |
Acti-stain™535 | PHDR1 | 535/585 TRITC濾波器組 | 430 | 27 | 12 | 36 +/- 7 |
Acti-stain™555 | PHDH1 | 535/585 TRITC濾波器組 | 551 | 46 | 16 | 63 +/- 8 |
Acti-stain™670 | PHDN1 | 640/680 Cy5濾光片組 | 332 | 8 | 18 | 50 +/- 12 |
* = AFU通過定量細胞成像測量。** =在沒有抗褪色的情況下在染色的Swiss 3T3細胞中測量。
引用：
oitbak等，2011。微小RNA在神經(jīng)干細胞支持內(nèi)皮形態(tài)發(fā)生中的作用。血管細胞。v 3，p 25。
Yuan et al。，2012。使用同量異位標簽對胺代謝物進行亞秒級絕dui定量，以發(fā)現(xiàn)哺乳動物細胞中的通路活化。肛門。化學。第84頁，第2892-2899頁。
問題1：我可以使用熒光標記的鬼筆環(huán)肽染色活細胞中的F-肌動蛋白嗎？
答案1： 不幸的是，不，鬼筆環(huán)肽不能用于在活細胞中染色F-肌動蛋白。鬼筆環(huán)肽用于在固定細胞中染色F-肌動蛋白。熒光鬼筆環(huán)肽僅與F-肌動蛋白的天然四級結構結合，提供低背景。鬼筆環(huán)肽結合的正確固定條件是在PBS中的3.7％（v / v）多聚甲醛10分鐘，因為它保留了鬼筆環(huán)肽的高親和力結合所必需的季銨蛋白結構。甲醇固定破壞天然構象，因此不適合用鬼筆環(huán)肽染色F-肌動蛋白。為了監(jiān)測活細胞中的肌動蛋白動力學，建議微量注射羅丹明標記的肌動蛋白（Cat。＃APHR或AR05）。有關更多信息，請參閱這些數(shù)據(jù)表。
問題2：哪種熒光標記的鬼筆環(huán)肽穩(wěn)定/亮？
答案2： Acti-stains中亮和穩(wěn)定的是Acti-stain 488（綠色熒光; Cat。＃PHDG1）。有關我們所有Acti-stains的更多信息，請參閱下表。
共軛 | 貓。＃ | 波長（Ex / EM） | 亮度（AFU） | 光漂白的穩(wěn)定性*（1/2秒壽命） | 背景（總AFU在100 nM時的百分比） |
Acti-stain™488 | PHDG1 | 535分之485 | 832 | 57 | 五 |
Acti-stain™535 | PHDR1 | 585分之535 | 430 | 27 | 12 |
Acti-stain™555 | PHDH1 | 585分之535 | 551 | 46 | 16 |
Acti-stain™670 | PHDN1 | 六百八十零分之六百四十 | 332 | 8 | 18 |
* =在沒有抗褪色的情況下測量。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 | |
BK165-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK165 | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
BK163-S | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK163 | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
BK160-S | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK160 | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
BK162-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK162 | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
BK161-S | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK161 | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
AAC04-Beads | Acetyl-Lysine Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
APY03-Beads | Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
ASM11-Beads | SUMOylation 1 Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
ASM24-Beads | SUMOylation 2/3 Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
UBA01-Beads | Ubiquitination Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
CIG02-Beads | Acetyl-Lysine Control Beads | ea | cytoskeleton | |
CIG03-Beads | SUMO1 IP Control Beads | ea | cytoskeleton | |
CIG01-Beads | IgG Control Beads | ea | cytoskeleton | |
CUB02-Beads | Ubiquitination Control Beads | ea | cytoskeleton | |
BLR01 | BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit | ea | cytoskeleton | |
BLR02 | BlastR™ Rapid Filtration Kit | ea | cytoskeleton | |
AAC02 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1) | ea | cytoskeleton | |
AAC03 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton | |
AAC03-HRP | Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton | |
AAC01 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20) | ea | cytoskeleton | |
APY03 | Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton | |
APY03-HRP | Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton | |
ASM01 | SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16) | ea | cytoskeleton | |
ASM24 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2) | ea | cytoskeleton | |
ASM23 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton | |
ASM23-HRP | SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton | |
AUB01 | Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton | |
AUB01-HRP | Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton | |
PHDG1 | Acti-stain 488 phalloidin | ea | cytoskeleton | |
PHDH1 | Acti-stain 555 phalloidin | ea | cytoskeleton | |
PHDN1 | Acti-stain 670 phalloidin | ea | cytoskeleton | |
BK001 | Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton | |
BK003 | Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton | |
AKL95 | Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
AD99 | Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton | |
AS99 | Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle | ea | cytoskeleton | |
AKL99 | Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
AKF99 | Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
AP05 | Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
APHR | Actin protein (rhodamine): human platelet | ea | cytoskeleton | |
AR05 | Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
AT01 | Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
RP01P | Arp2/3 protein complex: porcine brain | ea | cytoskeleton | |
CS-TFC01 | Cardiac Thin Filament Complex (CTFC) | ea | cytoskeleton | |
CF01 | Cofilin 1 protein: human recombinant | ea | cytoskeleton | |
HPG6 | Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant | ea | cytoskeleton | |
MH01 | Heavy meromyosin protein | ea | cytoskeleton | |
CS-MH03 | Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment) | ea | cytoskeleton | |
CS-MYS03 | Myosin - cardiac S1 fragment | ea | cytoskeleton | |
CS-MYS04 | Myosin - skeletal muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton | |
CS-MYS05 | Myosin - smooth muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton | |
MY02 | Myosin II protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
MY03 | Myosin protein: bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton | |
PR02 | Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant | ea | cytoskeleton | |
PHDR1 | Rhodamine Phalloidin | ea | cytoskeleton | |
CY-SC001 | SiR-Actin Kit | ea | cytoskeleton | |
CY-SC013 | SiR700-Actin Kit | ea | cytoskeleton | |
VCG03 | WASP protein VCA domain: GST tagged: human | ea | cytoskeleton | |
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