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            Cytoskeleton AKL95-C說明書

            更新時間:2018-08-17      點擊次數:2858

             

            Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號轉導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產品。我們專注于生產純化蛋白質和易于使用的試劑盒,以研究生物化學和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品CytoDYNAMIX Screens™)。

            除了我們現有的產品,我們還在產品線中為微管,微管蛋白,運動蛋白,小G蛋白效應物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務。

             

            結合蛋白質

            · 概述

            · 關于

            · CITATIONS

            · 常見問題解答

             

            測定所有肌動蛋白結合蛋白(ABP)以確保其活性與公布的值相當。測定因產品而異,包括F-肌動蛋白切斷測定,F-肌動蛋白激活的ATP水解和肌動蛋白聚合測定。顯示了測量WASP VCA結構域蛋白在肌動蛋白聚合中的作用(右)。

             

            Cytoskeleton,Inc。銷售一系列純化的肌動蛋白結合蛋白。所有Cytoskeleton的肌動蛋白結合蛋白都具有高純度,并經過嚴格的生物活性測試。細胞骨架還為肌動蛋白結合蛋白研究提供肌動蛋白,抗體和試劑盒。

             

            由Arp2 / 3和WASP VCA結構域刺激的肌動蛋白聚合。試劑盒BK003用于研究Arp2 / 3(Cat。#RP01)和WASP VCA(Cat。#VCG03)結構域對肌動蛋白聚合的影響

            肌動蛋白與細胞中的多種蛋白質相互作用
            *,F-和G-肌動蛋白與細胞中的多種蛋白質相互作用(14)??。目前有超過150種已知的肌動蛋白結合蛋白(ABP),其占細胞蛋白的約25%。ABP在肌動蛋白細胞骨架上賦予大量功能多樣性,其涉及諸如肌肉收縮,唇形突破,細胞運動,胞質分裂和細胞質流動的過程。研究這些過程如何調節肌動蛋白絲功能和動力學是一個重要且不斷增長的研究領域。

            可以通過使用生物化學,遺傳學和免疫學方法分離和研究肌動蛋白結合蛋白。因為存在超過50種類型的肌動蛋白結合蛋白,所以用于鑒定它們的方法及其功能/活性也是多種多樣的。肌動蛋白親和柱通常用于親和純化ABP,無論它們是F-或G-肌動蛋白結合。可以通過利用芘肌動蛋白熒光的聚合增強來進行顯示潛在ABP影響肌動蛋白動力學的簡單測定(參見測量肌動蛋白聚合物部分)。這種性質的研究有助于鑒定新的肌動蛋白結合蛋白。有幾篇值得一讀的關于識別和量化新肌動蛋白結合蛋白的可能方法的評論(15,16,17)?

            問題1:哪種肌動蛋白結合蛋白(ABP)可用作F-肌動蛋白結合對照? 

            答案1:肌動蛋白結合蛋白α-輔肌動蛋白(Cat。#AT01)是一種F-肌動蛋白結合和交聯蛋白,使其可用作F-肌動蛋白結合研究的對照。它的Kd是1μM,這意味著在該濃度下發生50%結合。因此,我們的目標是使用 2μM的α-肌動蛋白作為結合測定中的陽性對照。在結合反應中,2μM濃度的α-輔肌動蛋白相當于0.23μg/μl。此外,α-輔肌動蛋白對pH敏感,其高親和力發生在pH 7.0。

             

            問題2:Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動蛋白活力? 

            答案2:遺憾的是,我們不會出售運動級肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動蛋白運動試驗。我們發現質量控制測試非常難以復制,因此我們無法充分確保試劑的質量。因此,肌球蛋白(Cat。#MY02MY03)和重型meromyosin蛋白(Cat。#MH01)不推薦用于F-肌動蛋白運動測定。已經測試過這些試劑的客戶在運動方面沒有取得很好的成功,因此我們不建議購買樣品進行測試。如果需要運動級肌動蛋白或重型meromyosin,我們建議遵循原始方案(Kron和Spudich,1985)并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩定性。

                參考文獻:  SJ Kron和JA Spudich,1985年。熒光肌動蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動。PNAS,83,6272-6276。

             

            結合蛋白質系列產品:

             

            PHDG1

            Acti-stain 488 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            PHDH1

            Acti-stain 555 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            PHDN1

            Acti-stain 670 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            BK001

            Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

            ea

            cytoskeleton

            BK003

            Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

            ea

            cytoskeleton

            AKL95

            Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AD99

            Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

            ea

            cytoskeleton

            AS99

            Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

            ea

            cytoskeleton

            AKL99

            Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AKF99

            Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AP05

            Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            PHDG2

            Acti-stain 488 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            PHDH2

            Acti-stain 555 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            PHDN2

            Acti-stain 670 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            BK005

            Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

            ea

            cytoskeleton

            BK007

            Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

            ea

            cytoskeleton

            AKL96

            Actin protein (>96% pure): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AD100

            Actin protein (>100% pure): bovine cardiac muscle

            ea

            cytoskeleton

            AS100

            Actin protein (>100% pure): chicken gizzard muscle

            ea

            cytoskeleton

            AKL100

            Actin protein (>100% pure): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AKF100

            Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AP06

            Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            PHDG3

            Acti-stain 488 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            PHDH3

            Acti-stain 555 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            PHDN3

            Acti-stain 670 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            BK009

            Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

            ea

            cytoskeleton

            BK011

            Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

            ea

            cytoskeleton

            AKL97

            Actin protein (>97% pure): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AD101

            Actin protein (>101% pure): bovine cardiac muscle

            ea

            cytoskeleton

            AS101

            Actin protein (>101% pure): chicken gizzard muscle

            ea

            cytoskeleton

             

            肌動蛋白(純度> 95%):兔骨骼肌

            Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

             

            1x1毫克(Cat。#AKL95-B)

            5x1 mg(Cat。#AKL95-C)

            產品用途包括

            · 肌肉肌動蛋白結合蛋白的鑒定和表征

            · 體外肌動蛋白聚合研究

            · Western印跡分析的抗體標準


            從兔骨骼肌中純化出肌動蛋白材料。 AKL99肌動蛋白純度大于99%,AKL95純度大于95%。肌肉肌動蛋白的分子量約為43kDa。兔肌肉肌動蛋白作為白色凍干粉末提供。凍干的蛋白質在4℃下干燥至<10%濕度時保存6個月。當再 在蒸餾水中構成為10毫克/毫升,該蛋白質是在以下緩沖液:5mM的的Tris-HCl pH 8.0中,0.2毫米氯化鈣2,0.2mM的ATP,5%蔗糖和1%的葡聚糖。

            純度
            通過在12%聚丙烯酰胺凝膠上掃描Coomassie Blue染色蛋白的光密度測定法測定純度。AKL99由> 99%純肌肉肌動蛋白組成,而AKL95純度> 95%(見圖1)。

             

             

             

             


            圖1:圖1.兔骨骼肌肌動蛋白的純度。在SDS-PAGE凝膠上運行100μg> 99%純(AKL99)和> 95%純(AKL95)兔骨骼肌肌動蛋白,并用考馬斯藍染色。箭頭表示肌動蛋白,箭頭表示α-肌動蛋白污染物(115kDa)。純化的肌動蛋白中的微量雜質主要是肌動蛋白結合蛋白,例如α-肌動蛋白和凝溶膠蛋白。

             

            生物活性
            肌肉肌動蛋白的生物活性由其在體外有效聚合成長絲(F-肌動蛋白)的能力和在旋轉分析中與未聚合組分分離的能力決定。嚴格的質量控制確保AKL99產生> 90%的F-肌動蛋白,AKL95在該測定中產生> 80%的F-肌動蛋白。

             

            問題1:儲存肌動蛋白的*方法是什么,以確保大的穩定性和保質期?

            答案1:   細胞骨架提供我們所有的肌動蛋白作為凍干粉末,以便它們可以在室溫下運輸。收到后,凍干粉末應在4℃下儲存在帶有干燥劑的密封容器中。重要的是監測干燥劑的新鮮度并確保其繼續吸收水分以保護凍干的肌動蛋白。妥善儲存后,凍干肌動蛋白保證自購買之日起6個月內保持穩定。或者,肌動蛋白可立即以推薦的濃度重新懸浮,等分,在液氮中快速冷凍并儲存在-70℃。冷凍的等分試樣可穩定6個月。解凍冷凍等分試樣時,重要的是在室溫水浴中解凍。

             

            問題2:聚合后儲存F-肌動蛋白的*方法是什么?

            答案2:   G-肌動蛋白在4°C下穩定2天,需要二價陽離子,pH 6.5 - 8.0和ATP穩定性。F-肌動蛋白是穩定的,可以在4°C下儲存1-2周。F-肌動蛋白需要ATP(0.2mM)和Mg2 +(2mM)的穩定性,并且在pH6.5和pH8.5以下是不穩定的。F-肌動蛋白對冷凍不穩定。F-肌動蛋白可以轉移到各種緩沖液(例如HEPES,磷酸鹽等)而沒有不利影響。我們建議在4°C下儲存F-肌動蛋白時,添加抗菌劑,如100μg/ ml氨芐青霉素和10μg/ ml氯霉素。

             

            Mohammad等,2012。Flightless I是一種粘附相關的肌動蛋白加帽蛋白,可調節細胞遷移。FASEB?。doi:10.1096 / fj.11-202051。

            Reay等,2012。核因子κB抑制對血清型9腺相關病毒(AAV9)微小肌營養不良蛋白基因轉移至mdx小鼠的影響。摩爾。醫學。v 18 pp 466-476。

            Windhorst等,2011。肌醇-1,4,5-三磷酸-3-激酶-A對惡性轉化細胞運動的功能作用。詮釋。J.癌癥。第129卷,第1300-1309頁。

            Arora等,2004。凝溶膠蛋白通過rac依賴性步驟介導膠原蛋白吞噬作用。摩爾。生物學。細胞。第15卷,第588-599頁。

            Ishikawa等,2004。來自低溫電子顯微鏡的棘阿米巴肌球蛋白IC尾的子域組織。PROC。國家科。科學院。科學。美國。第101卷,第12189-12194頁。

            Balcer等,2003。通過高分子量Srv2 / CAP復合物,cofilin,profilin和Aip1協調調節肌動蛋白絲轉換。CURR。生物。第13卷,第2159-2169頁。

            Loomis等,2003.Espin交聯導致體內微絨毛型平行肌動蛋白束的延長。J. Cell Biol。第163卷,第1045-1055頁。

            Upadhyaya等,2003。通過使用肌動蛋白推進的脂質囊泡探測聚合力。PROC。國家科。科學院。科學。美國。第100卷,第4521-4526頁。

            Humphries等,2002。通過肌動蛋白結合蛋白冠狀蛋白直接調節Arp2 / 3復合物的活性和功能。J. Cell Biol。第159卷,第993-1004頁。

            Sagot等,2002。由Bni1和profilin介導的肌動蛋白成核機制。納特。細胞生物學。第4卷,第626-631頁。

            Engqvist-Goldstein等,2001。肌動蛋白結合蛋白Hip1R在胞吞作用的早期階段與網格蛋白結合并在體外促進網格蛋白裝配。J. Cell Biol。第154號,第1209-1223頁。

             

             

            貨號

            品名

            規格

            品牌

            BK165-S

            Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

            (10 assay)

            cytoskeleton

            BK165

            Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

            (30 assay)

            cytoskeleton

            BK163-S

            Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

            (10 assay)

            cytoskeleton

            BK163

            Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

            (30 assay)

            cytoskeleton

            BK160-S

            Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

            (10 assay)

            cytoskeleton

            BK160

            Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

            (30 assay)

            cytoskeleton

            BK162-S

            Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

            (10 assay)

            cytoskeleton

            BK162

            Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

            (30 assay)

            cytoskeleton

            BK161-S

            Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

            (10 assay)

            cytoskeleton

            BK161

            Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

            (30 assay)

            cytoskeleton

            AAC04-Beads

            Acetyl-Lysine Affinity Beads

            ea

            cytoskeleton

            APY03-Beads

            Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

            ea

            cytoskeleton

            ASM11-Beads

            SUMOylation 1 Affinity Beads

            ea

            cytoskeleton

            ASM24-Beads

            SUMOylation 2/3 Affinity Beads

            ea

            cytoskeleton

            UBA01-Beads

            Ubiquitination Affinity Beads

            ea

            cytoskeleton

            CIG02-Beads

            Acetyl-Lysine Control Beads

            ea

            cytoskeleton

            CIG03-Beads

            SUMO1 IP Control Beads

            ea

            cytoskeleton

            CIG01-Beads

            IgG Control Beads

            ea

            cytoskeleton

            CUB02-Beads

            Ubiquitination Control Beads

            ea

            cytoskeleton

            BLR01

            BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

            ea

            cytoskeleton

            BLR02

            BlastR™ Rapid Filtration Kit

            ea

            cytoskeleton

            AAC02

            Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

            ea

            cytoskeleton

            AAC03

            Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

            ea

            cytoskeleton

            AAC03-HRP

            Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

            ea

            cytoskeleton

            AAC01

            Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

            ea

            cytoskeleton

            APY03

            Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

            ea

            cytoskeleton

            APY03-HRP

            Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

            ea

            cytoskeleton

            ASM01

            SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

            ea

            cytoskeleton

            ASM24

            SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

            ea

            cytoskeleton

            ASM23

            SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

            ea

            cytoskeleton

            ASM23-HRP

            SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

            ea

            cytoskeleton

            AUB01

            Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

            ea

            cytoskeleton

            AUB01-HRP

            Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

            ea

            cytoskeleton

            PHDG1

            Acti-stain 488 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            PHDH1

            Acti-stain 555 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            PHDN1

            Acti-stain 670 phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            BK001

            Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

            ea

            cytoskeleton

            BK003

            Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

            ea

            cytoskeleton

            AKL95

            Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AD99

            Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

            ea

            cytoskeleton

            AS99

            Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

            ea

            cytoskeleton

            AKL99

            Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AKF99

            Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AP05

            Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            APHR

            Actin protein (rhodamine): human platelet

            ea

            cytoskeleton

            AR05

            Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            AT01

            Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            RP01P

            Arp2/3 protein complex: porcine brain

            ea

            cytoskeleton

            CS-TFC01

            Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

            ea

            cytoskeleton

            CF01

            Cofilin 1 protein: human recombinant

            ea

            cytoskeleton

            HPG6

            Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

            ea

            cytoskeleton

            MH01

            Heavy meromyosin protein

            ea

            cytoskeleton

            CS-MH03

            Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

            ea

            cytoskeleton

            CS-MYS03

            Myosin - cardiac S1 fragment

            ea

            cytoskeleton

            CS-MYS04

            Myosin - skeletal muscle S1 fragment

            ea

            cytoskeleton

            CS-MYS05

            Myosin - smooth muscle S1 fragment

            ea

            cytoskeleton

            MY02

            Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

            ea

            cytoskeleton

            MY03

            Myosin protein: bovine cardiac muscle

            ea

            cytoskeleton

            PR02

            Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

            ea

            cytoskeleton

            PHDR1

            Rhodamine Phalloidin

            ea

            cytoskeleton

            CY-SC001

            SiR-Actin Kit

            ea

            cytoskeleton

            CY-SC013

            SiR700-Actin Kit

            ea

            cytoskeleton

            VCG03

            WASP protein VCA domain: GST tagged: human

            ea

            cytoskeleton

             

             

             

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