westbioscience大腸桿菌系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)

所有West Bioscience定制的蛋白表達(dá)和純化均在我們的加利福尼亞工廠進(jìn)行，以確保高的質(zhì)量和的客戶滿意度。我們一直是提供高質(zhì)量重組蛋白表達(dá)和純化服務(wù)的，尤其是在定制蛋白設(shè)計(jì)領(lǐng)域。我們向客戶交付了數(shù)千種蛋白質(zhì)。

 westbioscience大腸桿菌系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)

 優(yōu)點(diǎn)

• 表達(dá)水平可能很高
• 低成本
• 快速增長(zhǎng)
• 可擴(kuò)展
• 簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)換協(xié)議
• 可以更改許多參數(shù)以優(yōu)化表達(dá)式

 缺點(diǎn)

• 低效的二硫鍵形成
• 蛋白在細(xì)胞質(zhì)中折疊不良
• 包涵體形成
• 體外重折疊方案效率低下–可能會(huì)抵消優(yōu)勢(shì)
• 密碼子的用法不同于真核生物
• 少的翻譯后修飾
• 內(nèi)毒素

克隆

我們將通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)亞克隆或PCR克隆將您的插入片段克隆到表達(dá)載體中。  將用于將目的基因轉(zhuǎn)移到表達(dá)載體中。將對(duì)克隆進(jìn)行*排序以進(jìn)行驗(yàn)證。

 表達(dá)篩選

含有目的基因的表達(dá)載體將被轉(zhuǎn)化到大腸桿菌的表達(dá)菌株中以產(chǎn)生蛋白質(zhì)。幾個(gè)單獨(dú)的克隆將在小規(guī)模的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行篩選。表達(dá)結(jié)果將通過(guò)SDS / PAGE和蛋白質(zhì)印跡進(jìn)行分析。

 表達(dá)優(yōu)化

表達(dá)條件將通過(guò)誘導(dǎo)時(shí)間，溫度和培養(yǎng)基條件來(lái)優(yōu)化。結(jié)果將通過(guò)SDS-PAGE和Western blot確認(rèn)。

 蛋白質(zhì)表征

將測(cè)試小規(guī)模的培養(yǎng)物，并對(duì)表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行表征，以區(qū)分純化標(biāo)簽的細(xì)胞位置，溶解度，產(chǎn)量和可及性。將設(shè)計(jì)生產(chǎn)和純化蛋白質(zhì)的詳細(xì)策略。

 蛋白質(zhì)生產(chǎn)

使用搖瓶將以升量進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。如果您喜歡自己純化蛋白質(zhì)，則將收到細(xì)胞沉淀物以及帶有SDS-PAGE和Western blot分析結(jié)果的完整報(bào)告。

 蛋白質(zhì)純化

可以使用多種方法純化蛋白質(zhì)，例如包涵體制備或親和柱純化。