高分子量基因組 DNA：使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離出高分子量的高分子量基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理，并以 100 µL 洗脫。500 納克純化的 DNA 在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上與 GeneRuler™1kb Plus 階梯（Thermo Scientific）一起電泳；最上面的 DNA 梯帶是 20,000 bp。

來自全血的高純度基因組 DNA，不含 RNase：使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離的高純度基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理，并以 100 µL 洗脫。通過分光光度法分析洗脫的DNA以確定純度比和DNA濃度。

來自全血的無抑制劑基因組 DNA：分離的基因組 DNA 的 SPUD 分析表明不存在共純化的抑制劑。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理，并以 100 µL 洗脫。如 Analytical Biochemistry, 2006 Apr 15;351(2):308-10 中詳述的，對 100 ng 洗脫的 DNA 進(jìn)行了抑制 SPUD 擴(kuò)增子擴(kuò)增的能力分析。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對于 SPUD 陽性對照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。

基因組靶標(biāo)的成功qPCR擴(kuò)增：對分離的基因組DNA的qPCR分析表明，基因組靶標(biāo)的成功擴(kuò)增和檢測。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理，并以 100 µL 洗脫。使用 ABI TaqMan™ β-肌動(dòng)蛋白 qPCR 測定法測定標(biāo)稱 20 ng 洗脫的 DNA（基于 Nanodrop 分析）。標(biāo)準(zhǔn)曲線跨越了 100 – 0.032 ng（27,600 – 8.8 個(gè)基因組當(dāng)量）的人類 DNA。測定效率計(jì)算為 102%。

分離的基因組 DNA 的酶促修飾：使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對從全血中分離的基因組 DNA 進(jìn)行限制性消化。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理，并以 100 µL 洗脫。1 µg 純化的 DNA 在 37°C 下用 BamHI、BglII 和 BamHI+BglII 消化 30 分鐘。此后限制性產(chǎn)物在1％瓊脂糖凝膠/TAE上電泳1小時(shí)。

從分離的基因組和線粒體 DNA 進(jìn)行長距離 PCR ：使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對從全血中分離的基因組 DNA 進(jìn)行長距離 PCR。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進(jìn)行處理，并以 100 µL 洗脫。使用 TaKaRa LA Taq® 和 (A) 7.3 kb 人葡糖腦苷脂酶片段和 (B) 8.2 kb 線粒體 NADH-泛醌氧化還原酶鏈 1 (MT-ND1) 片段的引物，通過 PCR 擴(kuò)增 20 ng 純化 DNA。 PCR 產(chǎn)物在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上電泳 1 小時(shí)。這些高分子量目標(biāo)的成功 PCR 擴(kuò)增突出了分離 DNA 的結(jié)構(gòu)完整性和我們的試劑盒分離線粒體 DNA 的能力。

與商業(yè)血液穩(wěn)定劑管的兼容性： 血液基因組 DNA 試劑盒可用于從商業(yè)血液穩(wěn)定劑管中分離不含抑制劑的 gDNA。將捐獻(xiàn)者血液抽取到 3 種市售血液穩(wěn)定產(chǎn)品中，并在室溫下儲(chǔ)存 4 天。使用標(biāo)準(zhǔn)方案通過 Ocean NanoTech 試劑盒處理來自試管的 350 µL 等分試樣。作為穩(wěn)定過程的一部分，DNA/RNA Shield™ 管也沒有使用 Ocean NanoTech 裂解緩沖液進(jìn)行處理，因?yàn)?DNA/RNA Shield™ 裂解細(xì)胞。如分析生物化學(xué)，2006 年 4 月 15 日；351(2)：308-10 中詳述的，測定了從每次分離中洗脫的 100 ng DNA 抑制 SPUD 擴(kuò)增子擴(kuò)增的能力。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對于 SPUD 陽性對照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。

性能與其他商用產(chǎn)品的對比： Ocean NanoTech的Blood gDNA試劑盒大大優(yōu)于其他基于磁珠的血液gDNA分離試劑盒。來自同一供體的血液被吸入 K2-EDTA 管中，并使用試劑盒所需的輸入血量通過每個(gè)試劑盒處理。分離的 DNA 以 100 µL 洗脫，并通過 NanoDrop 分析和 Qubit 分析評(píng)估純度。計(jì)算每個(gè)試劑盒的總產(chǎn)量（基于 Qubit 測量）和作為血液輸入量函數(shù)的產(chǎn)量。所有值均來自三個(gè)生物學(xué)重復(fù)。