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LowCross-Buffer®使用常見問題及解答

1. LowCross-Buffer®具體是什么?

LowCross Buffer®是一種樣品/抗體緩沖液，用于免疫分析（如ELISA、Western blotting、蛋白質(zhì)陣列和免疫PCR）。它有助于消除干擾。干擾如非特異性結(jié)合、交叉反應(yīng)和基質(zhì)效應(yīng)。抗體和抗原之間的高親和力結(jié)合不會受到負面影響，而抗體的不必要結(jié)合會受到抑制。

2. LowCross-Buffer®為什么能減少基質(zhì)效應(yīng)?

大多數(shù)所謂的基質(zhì)效應(yīng)都是基于基質(zhì)成分（如人血清樣本中的血清蛋白）與待測物或抗體之間不需要的低或中親和力結(jié)合。

待測物可能會被樣本中的蛋白質(zhì)或其他成分所掩蓋，從而導(dǎo)致抗體不能與待測物結(jié)合。此外，基質(zhì)成分也可能會掩蓋抗體。LowCross Buffer®減少了抗體的掩蔽。

3. LowCross-Buffer®該怎樣使用?

LowCross Buffer®是用于標(biāo)本（如血清或血漿）和/或檢測抗體的稀釋緩沖液。這取決于實驗干擾。如果干擾如非特異性結(jié)合或交叉反應(yīng)來自檢測抗體，我們建議在LowCross Buffer®中稀釋檢測抗體。

4. LowCross-Buffer®需要稀釋使用嗎?

不用。LowCross-Buffer®為即用型，

樣本或檢測抗體可直接用這個緩沖液稀釋。只有在競爭性分析或者某些應(yīng)用如免疫組織化學(xué)中，可以用水貨PBS稀釋 LowCross-Buffer®后使用。在這種情況 下，用戶需通過測試找到理想的混合比。

5. LowCross-Buffer®可以與單克隆或多克隆抗體一起使用嗎?

可以。但如果你使用多克隆抗體，需注意多克隆抗體組成中含有許多不同親和力的抗體，LowCross-Buffer®僅允許高親和力結(jié)合，而低親和力和重親和力結(jié)合則會減少。如果使用LowCross-Buffer®，可能需要適度增加多克隆檢測抗體的濃度。抗體濃度的增加也會增加高親和力抗體的濃度。而LowCross-Buffer®可以抑制低親和力和中親和力抗體的結(jié)合。

是否必須增加抗體的濃度取決于抗體的質(zhì)量。

6. LowCross-Buffer®緩沖液的組分是否會影響酶法檢測的顯色反應(yīng)?

LowCross-Buffer®不會對堿性磷酸酶或過氧化物酶的酶活性產(chǎn)生負面影響。有時用戶使用LowCross-Buffer®孵育標(biāo)記的抗體可以增加酶活性。

7. 采用過氧化物酶標(biāo)記二抗進行檢測的夾心法ELISA，實驗結(jié)果出現(xiàn)背景的情況，這是什么原因?qū)е碌哪兀渴褂肔owCross-Buffer®是否會有幫助?

重要的是要知道二抗是否經(jīng)其他哺乳動物的抗體預(yù)吸附處理。抗兔IgG的二抗也可與小鼠IgG或山羊IgG發(fā)生高親和力的交叉反應(yīng)，除非針對這些物種的抗體進行純化。原因是哺乳動物抗體序列同源性高。二抗通常不純化（預(yù)吸附），因此會發(fā)生高親和力的交叉反應(yīng)。在這種情況下，使用LowCross Buffer®沒有幫助。二抗必須更換成不與包被抗體發(fā)生交叉反應(yīng)的預(yù)吸附的抗體。

8. LowCross Buffer®是否可以與熒光染料結(jié)合使用，譬如在蛋白分析中？

可以。蛋白分析中會帶來積極的實驗結(jié)果。

在某些使用青色染料（例如Cy5、Cy3、Oyster-dyes) 應(yīng)用中，結(jié)合LowCross Buffer®使用可以觀察到熒光信號增強。

9. LowCross-Buffer®能否多次凍融?

LowCross-Buffer®可經(jīng)數(shù)次凍融，但重要的是在使用前需將該緩沖液充分混合。

10. LowCross-Buffer®能否替代如Western blotting膜、ELISA板的表面封閉劑?

不可以! LowCross-Buffer®不是表面封閉劑，你可以用她稀釋樣本或抗體。對于封閉，我們建議使用The Blocking Solution。這款封閉劑的封閉效果比市面上大多數(shù)封閉劑的要更優(yōu)。

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