Miltenyi磁柱選擇及標(biāo)記問題

一、標(biāo)記策略

用MACS進行磁分離，zui重要的參數(shù)就是高質(zhì)量的標(biāo)記。對陽性細(xì)胞的標(biāo)記應(yīng)盡可能強，而背景要盡可能低，才能獲得對磁標(biāo)記的陽性細(xì)胞和未標(biāo)記的陰性細(xì)胞的分辨。有多種不同的標(biāo)記策略可供參考：

1、直接標(biāo)記

直接標(biāo)記是zui快速和zui特異的磁標(biāo)記方法。

2、間接標(biāo)記

幾乎所有的單克隆抗體或多克隆抗體都可以用于間接標(biāo)記。用無標(biāo)記的、生物素化的或FITC、PE或APC結(jié)合的一抗標(biāo)記細(xì)胞，再用抗免疫球蛋白、抗生物素、鏈霉菌親和素、抗FITC、抗PE、或抗APC的微珠分別進行磁標(biāo)記。間接標(biāo)記可以放大磁標(biāo)記，用于分離表達(dá)比較弱的標(biāo)記很有用。在間接標(biāo)記中，以使用生物素化的或PE表記的一抗結(jié)果特異性。

二、磁分離柱的選擇

下表為德國Miltenyi公司的分離柱種類，其中 MS, LS, XS柱適合于正性細(xì)胞選擇，如果磁標(biāo)記很強，也可用于負(fù)性選擇。Large Cell Columns與MS柱相比，孔徑較大，適合于人和動物大細(xì)胞的正性選擇，如巨核細(xì)胞。新的LD柱是為zui方便的負(fù)選設(shè)計，代替了AS 和BS柱。LD 柱和CD及D柱即使在磁標(biāo)記很弱的情況下也能獲得zui高的負(fù)選效率。µ 和M柱是為分子生物學(xué)方面的應(yīng)用而設(shè)計的。

三、分選策略

分選策略也要根據(jù)實際情況進行選擇

1、正性選擇（positive selection）

磁珠對細(xì)胞功能和活力的影響很小，因此一般首先應(yīng)該考慮正選策略。正選具有速度快和單克隆抗體的特異性優(yōu)勢，大多數(shù)情況下，正選省時省錢。

2、負(fù)性選擇（negative selection）

如果正選策略不適合您的實驗，比如有可能因抗體結(jié)合引起細(xì)胞活化或沒有針對靶細(xì)胞的特異性抗體，可以選擇負(fù)選策略。MACS

附：Miltenyi分離柱技術(shù)指標(biāo)及圖片