Pfu DNA 聚合酶

· Pfu DNA 聚合酶說(shuō)明
本酶為Pyrococcus furiosus中分離的pfu DNA pol 基因在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后經(jīng)多次純化分離而得。Pfu DNA聚合酶具有3’-5’外切酶（校正）活性，當(dāng)聚合反應(yīng)發(fā)生堿基錯(cuò)配時(shí)，聚合酶的校正活性可將錯(cuò)配的堿基切除。Pfu DNA聚合酶為使用范圍zui廣的高保真DNA聚合酶，其錯(cuò)誤率僅為1.3x10-6，推薦Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反應(yīng)。

· 用途
用于要求保真度比較高的PCR反應(yīng)，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成等（參見(jiàn) Sinobio 實(shí)驗(yàn)方案）。

· 產(chǎn)品特點(diǎn)
高保真：Pfu DNA聚合酶是使用zui廣泛的高保真酶，其保真度為普通Taq酶的10倍。
靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出特定基因片段（圖例一）。
快捷：PCR反應(yīng)所必需試劑全集于一管之中，數(shù)分鐘即可完成反應(yīng)體系配置。
便利：10μl, 25μl 或50μl體系全部適用。

· 質(zhì)量保證
經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE檢測(cè)純度大于95%；
PCR方法檢測(cè)無(wú)大腸桿菌DNA殘留，無(wú)核酸內(nèi)、外切酶污染。

· 使用建議

Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端，無(wú)3’端"A"突出，其PCR產(chǎn)物的克隆有兩種方案。
1. PCR前引物進(jìn)行5’端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中（參見(jiàn) Sinobio實(shí)驗(yàn)方案）。
2. 將產(chǎn)物3’末端加A后再與T-Vector連接（參見(jiàn) Sinobio 實(shí)驗(yàn)方案）。
3. 由于Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加引物的長(zhǎng)度，理想的引物長(zhǎng)度為20-30堿基。另外為了減少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配置反應(yīng)體系，并zui后加入Pfu酶。

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· 其他說(shuō)明